TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Hröð hreinsun DNA úr ýmsum efnum til PCR greiningar.

TIANcombi DNA Lyse & Det PCR búnaðurinn samþykkir einstaka umbúðahönnun sem inniheldur öll hvarfefni fyrir skjót genamengun DNA undirbúnings og PCR mögnun. Það á við um hreinsun erfðamengis DNA í einu þrepi frá ýmsum sýnum (plöntuvefjum, fræjum, dýravef, blóði, geri og bakteríum) og síðari PCR mögnun og greiningu. Prótein, RNA og önnur efnaskiptaefnaskipti fjarlægð, útdráttur lífrænna leysa og etanólútfellingarþrep eru ekki nauðsynleg í öllu hreinsunarferlinu, sem gerir aðgerðina einfalda og fljótlega. Gæði vörunnar eru stöðug og áreiðanleg.

2 × Det PCR MasterMix sem þessu setti fylgir er mjög samhæft PCR hvarfefni sem getur magnað DNA á skilvirkan og sérstakan hátt án þess að fjarlægja óhreinindi eins og prótein. Þetta hvarfefni inniheldur Taq DNA fjölliðu, dNTP, MgCl2, biðminni, sem og aukahlutinn, fínstillirinn og stöðugleikinn fyrir PCR viðbrögð. Notkun hvarfefnisins gerir PCR viðbrögð hröð, einföld, viðkvæm, sértæk og stöðug. Þess vegna er þessi búnaður sérstaklega hentugur fyrir skimun með mikilli afköstum.

Köttur. Nei Pakkningastærð
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Vöruupplýsingar

Tilraunadæmi

Algengar spurningar

Vörumerki

Lögun

■ Einfalt og hratt: DNA er hægt að draga úr mismunandi vefjum á 5 mínútum án þess að þörf sé á fljótandi köfnunarefni.
■ Breiður notkun: Gildir fyrir plöntublöð, fræ, dýravef, blóðsýni (ferskt blóð, blóðstorknun, blóðtappa, þurrkaða blóðbletti o.s.frv.), Ger og bakteríur.
■ Sterk eindrægni: PCR hvarfefnið hentar til mögnunar á DNA sem dregið er úr ýmsum sýnishornum.

Umsóknir

■ Erfðagreining: Tilvalið val fyrir erfðagreiningu í stórum stíl.

Mikilvægar athugasemdir

■ Fyrir sýni sem innihalda mikið fenól, svo sem bómullarblöð, ætti inntaksmagn sýnis stranglega að vera minna en 0,4 mg, annars hefur PCR viðbrögð áhrif.

Hægt er að aðlaga allar vörur fyrir ODM/OEM. Nánari upplýsingar,vinsamlegast smelltu á sérsniðna þjónustu (ODM/OEM)


  • Fyrri:
  • Næst:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl DNA var dregið úr 5 mg af laufum og fræjum af maís, hveiti, hrísgrjónum, sojabaunum og bómull. DNA var magnað með PCR með sérstökum grunnum. 6 μl DNA úr alls 20 μl eluents var hlaðið á hverja braut.
    1: Jákvætt eftirlit erfðamengi; 2: skilið eftir sýni; 3: fræ sýni; 4: NTC; 5: D2000 grunnur
    Experimental Example M: TIANGEN merki D2000; 1: Jákvæð stjórn;
    2-7: Fjöldi þurrkaðra blóðbletta á síupappírnum er 1-6 í sömu röð; 8: Neikvæð stjórn.
    3 mm gata var notuð til að taka þurrkaða blóðblettina úr síupappírnum sem efni fyrir útdráttarprófið.
    6 μl DNA úr alls 20 μl eluents var hlaðið á hverja braut.
    Experimental Exampl M: TIANGEN merki D2000; 1: Jákvæð stjórn (erfðamengi DNA var notað sem sniðmát); 2-7: Magn blóðs bætt við er 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl og 60 μl, í sömu röð; 8-13: Magn blóðs bætt við er 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl og 60 μl í sömu röð; 14: NTC.
    6 μl DNA úr alls 20 μl eluents var sett á agarosahlaupið.
    Sp.: Engar mögnunarbönd

    A-1 sniðmát

    ■ Sniðmátið inniheldur prótein óhreinindi eða Taq hemla osfrv .—— Hreinsaðu DNA sniðmát, fjarlægðu prótein óhreinindi eða dragðu út sniðmát DNA með hreinsunarsettum.

    ■ Afmyndun sniðmátsins er ekki lokið —— Viðeigandi hækkun hitaskynjunarhitastigs og lengja skynjunartíma.

    ■ Niðurbrot sniðmáts —— Búðu til sniðmátið aftur.

    A-2 grunnur

    ■ Léleg gæði grunna —— Endurgera grunninn.

    ■ Niðurbrot grunnur ——Færðu háan styrk grunninn í lítið magn til varðveislu. Forðist að frjósa og þíða oft eða við 4 ° C hitaeiningu til lengri tíma.

    ■ Óviðeigandi hönnun grunna (td grunnlengd er ekki nægjanleg, dimer myndaður á milli grunna o.s.frv.) -Endurhannaðu grunna (forðist myndun grunndimers og auka uppbyggingar)

    A-3 mg2+einbeitingu

    ■ Mg2+ styrkur er of lítill —— Rétt aukning á Mg2+ einbeiting: Fínstilltu Mg2+ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg2+ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

    A-4 Glæðishiti

    ■ Hátt glæðingarhitastig hefur áhrif á bindingu grunns og sniðmáts. ——Lækkaðu hitaglæðann og fínstilltu ástandið með 2 ° C halla.

    A-5 framlengingartími

    ■ Stuttur framlengingartími —— lengja lengingu.

    Sp .: Rangt jákvætt

    Fyrirbæri: Neikvæð sýni sýna einnig markbandsröðina.

    A-1 mengun PCR

    ■ Krossmengun á markröð eða magnunarvörum —— Varlega skal ekki setja sýnið sem inniheldur markröðina í pípu í neikvæða sýnið eða hella því út úr skilvinduglasinu. Hvarfefnin eða búnaðurinn ætti að vera sjálfstýrður til að útrýma fyrirliggjandi kjarnsýrum og ákvarða tilvist mengunar með neikvæðum eftirlitstilraunum.

    ■ Mengun hvarfefnis —— Hreinsið hvarfefnin og geymið við lágt hitastig.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ styrkur er of lítill —— Rétt aukning á Mg2+ einbeiting: Fínstilltu Mg2+ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg2+ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

    ■ Óviðeigandi grunnhönnun og miðaröðin hefur samsvörun við röð sem ekki er miðuð. —— Endurhönnun grunnur.

    Sp .: Ósértæk mögnun

    Fyrirbæri: PCR mögnunarböndin eru í ósamræmi við væntanlega stærð, annaðhvort stór eða lítil, eða stundum eiga sér stað bæði sértæk mögnunarbönd og ósértæk mögnunarbönd.

    A-1 grunnur

    ■ Léleg grunnleiki

    —— Endurhönnun grunnur.

    ■ Grunnþéttleiki grunnsins er of hár ——Hækka eðlilega hitastigið rétt og lengja skynjunartímann.

    A-2 mg2+ einbeitingu

    ■ Mg2+ styrkur er of hár ——Lækkaðu Mg2+ styrkinn rétt: Fínstilltu Mg2+ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg2+ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

    A-3 hitastöðug fjölliðu

    ■ Of mikið magn ensíma —— Draga úr ensímmagni með viðeigandi millibili um 0,5 U.

    A-4 Glæðishiti

    ■ Glæðingarhitastigið er of lágt —— Viðeigandi hækkun á glæðingarhitastigi eða notaðu tveggja þrepa glæðingaraðferðina

    A-5 PCR hringrásir

    ■ Of mörg PCR hringrás —— Fækkaðu PCR hringrásum.

    Sp .: Pattery eða smear band

    A-1 grunnur——Léleg sértækni ——Hönnaðu grunninn að nýju, breyttu stöðu og lengd grunnunnar til að auka sérstöðu hans; eða framkvæma hreiður PCR.

    A-2 sniðmát DNA

    —— Sniðmátið er ekki hreint —— Hreinsið sniðmátið eða dragið út DNA með hreinsibúnaði.

    A-3 mg2+ einbeitingu

    ——Mg2+ styrkur er of hár ——Lækkaðu Mg rétt2+ einbeiting: Fínstilltu Mg2+ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg2+ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

    A-4 dNTP

    —— Styrkur dNTP er of hár —— Dragðu úr styrk dNTP á viðeigandi hátt

    A-5 Glæðishiti

    —— Of lágt glæðingarhitastig —— Viðeigandi hækkun á glæðingarhitastigi

    A-6 hringrásir

    ——Af mörgum hringrásum —— Háttu hringrásarnúmerið

    Sp .: Hversu mikið sniðmát DNA ætti að bæta við í 50 μl PCR viðbragðskerfi?
    ytry
    Sp.: Hvernig á að magna upp löng brot?

    Fyrsta skrefið er að velja viðeigandi fjölliðu. Venjulegur Taq pólýmerasi getur ekki prófarkalestur vegna skorts á 3'-5 'exonuclease virkni og misræmi mun stórlega draga úr skilvirkni brotanna. Þess vegna getur venjulegur Taq fjöllasi ekki magnað markbrot stærri en 5 kb á áhrifaríkan hátt. Taq pólýmerasa með sérstakri breytingu eða annarri hágæða fjölliðu ætti að velja til að bæta framlengingu skilvirkni og mæta þörfum langrar brotamagnunar. Að auki krefst mögnun langra brota samsvarandi aðlögun grunnhönnunar, afmyndunartíma, framlengingartíma, sýrustig buffer osfrv. Venjulega geta grunnir með 18-24 bp leitt til betri uppskeru. Til að koma í veg fyrir skemmdir á sniðmátum, ætti að minnka tímasetninguna við 94 ° C í 30 sekúndur eða minna í hverri lotu og tíminn til að hækka hitastigið í 94 ° C fyrir mögnun ætti að vera styttri en 1 mín. Þar að auki getur stilling hitastigs á um það bil 68 ° C og hönnun framlengingartíma í samræmi við hraða 1 kb/mín tryggt skilvirka mögnun langra brota.

    Sp.: Hvernig á að bæta mögnunartryggni PCR?

    Hægt er að minnka villuhlutfall PCR mögnunar með því að nota ýmsa DNA fjölliður með mikilli tryggð. Meðal allra Taq DNA fjölliða sem fundist hafa hingað til hefur Pfu ensím lægsta villuhlutfallið og hæsta tryggðina (sjá meðfylgjandi töflu). Til viðbótar við ensímval geta vísindamenn enn frekar dregið úr PCR stökkbreytingarhraða með því að fínstilla viðbragðsaðstæður, þar með talið að hámarka biðmassasamsetningu, styrk hitastöðugrar fjölliðu og fínstilla PCR hringrásarnúmer.

    Skrifaðu skilaboðin þín hér og sendu okkur