Blood Direct PCR Kit

Hröð mögnun á markgeninu beint með því að nota blóð sem sniðmát án útdráttar.

Þessi búnaður samþykkir erfðabreytta DNA-fjölliðu sem hindrar hemlun til að magna upp afrit gena í erfðamengi mannsins á skilvirkan hátt. Vel bjartsýni biðminni kerfið í þessum búnaði hjálpar fjölliðuþolinu sterklega að standast hindrun PCR hemla og getur þannig magnað DNA beint með því að nota blóð og ræktaðar frumur sem sniðmát. Þessi vara er auðveld í notkun og þarf ekki flókin skref eins og DNA hreinsun eða sýnishorn fyrir meðferð.
Þessi búnaður er til staðar sem 2 × MasterMix og hægt er að framkvæma viðbrögðin með því einfaldlega að bæta við blóðsniðmátinu og samsvarandi greiningargrunnum. Það er hægt að beita á ræktaðar frumur spendýra eins og manna, músa, svíns, nautgripa og annarra tegunda, svo og ferskt eða 4 ℃ frostvarið heilblóð, segavarnarlyf (EDTA, sítrat, heparín), fljótandi blóðtappa og þurra blóðbletti geymt á Whatman 903 og FTA Elute viðskiptakortum.

Köttur. Nei	Pakkningastærð
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Sendu okkur tölvupóst

Vöruupplýsingar

Tilraunadæmi

Algengar spurningar

Vörumerki

Lögun

■ Einfalt og hratt: PCR mögnun er hægt að framkvæma beint með því að nota blóð sem sniðmát, án þess að þörf sé á leiðinlegum skrefum við undirbúning sýnis og DNA útdrátt.
■ Mikil hreinleiki: Slepptu formeðferð sýnis og DNA útdráttarskrefum getur hjálpað til við að forðast krossmengun sýna.
■ Mikið afköst: Hægt er að framkvæma PCR auðkenni stórra sýna með því að sameina búnaðinn með 96/384-brunn PCR plötum.
■ Sterk alhliða: Þessi búnaður getur á áhrifaríkan hátt magnað upp háar GC -brot eða brot með flókinni efri uppbyggingu og mögnunarlengd getur verið allt að 5 kb.
■ Sterk streituþol: Hægt er að nota þennan búnað fyrir ýmsar tegundir og blóðsýni varðveitt með mismunandi hætti.

Umsóknir

PCR vörur þessa búnaðar innihalda „A“ í 3′-enda, sem er hægt að nota beint til TA vektor einræktunar. Hægt er að nota þennan búnað til mögnunar erfðamengja DNA-búta, erfðagreiningar með mikilli afköstum og arfgerðargreiningar (svo sem genagreiningu).

Hægt er að aðlaga allar vörur fyrir ODM/OEM. Nánari upplýsingar,vinsamlegast smelltu á sérsniðna þjónustu (ODM/OEM)

Fyrri: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Næst: Músarvefur Direct PCR Kit

	Með því að nota EDTA blóðþynningarstorku sem sniðmát voru 4 gen með mismunandi GC innihald magnuð með Blood Direct PCR Kit. PCR hvarfkerfið var 20 μl og 1 μl blóð var notað sem sniðmát. M: TIANGEN Marker II; 1: Brotstærð 1090 bp, GC innihald 68,1%; 2: Brotstærð 1915 bp, GC innihald 70,4%; 3: Brotstærð 448 bp, GC innihald 74,8%; 4: Brotstærð 1527 bp, GC innihald 61,5%. Tilraunaniðurstöður: Blood Direct PCR Kit getur í raun magnað upp DNA brot með GC innihaldinu á bilinu 61,5%-74,8%, sem bendir til þess að það sé hægt að magna upp há GC-brot.
	Með því að nota EDTA blóðþynningarstorku sem sniðmát, voru 5 gen með mismunandi lengd (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 og Hn4.0) mögnuð með Blood Direct PCR Kit. PCR hvarfkerfið var 20 μl og 1 μl blóð var notað sem sniðmát. M: TIANGEN Marker II; 1-3: 3 mismunandi blóðsýni; NTC: stjórna án grunna. Tilraunaniðurstöður: Blood Direct PCR Kit getur magnað brot með lengd allt að 4 kb, sem bendir til þess að það geti magnað langa brot.
	Með því að nota EDTA blóðþynningarstorku sem sniðmát var Blood Direct PCR Kit notað til að greina mismunandi blóðsýni með PCR. PCR hvarfkerfið var 20 μl og 1 μl blóð var notað sem sniðmát. M: TIANGEN Marker II; 1-9: hleðslumagn blóðs er 0,1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl og 5 μl í sömu röð; NTC: stjórn án sniðmáts Tilraunaniðurstöður: Blood Direct PCR Kit hefur mikla mótstöðu gegn blóði og getur magnað blóðsýni með hleðslusviðinu 0,1-5 μl.
	Blóðsýni úr mönnum, rottum, kjúklingum og öðrum tegundum með mismunandi meðferðum voru notuð sem sniðmát. Blood Direct PCR Kit var notað til að magna PRNP (manna, 750 bp), Actin (rotta, 200 bp) og β-Actin (Chicken, 1.0 kb). PCR hvarfkerfið var 20 μl og 1 μl blóð var notað sem sniðmát. M: TIANGEN merki II. Tilraunaniðurstöður: Hægt er að nota Blood Direct PCR Kit á mikið úrval af sýnum og hægt er að framkvæma beina PCR greiningu á blóðsýnum frá ýmsum tegundum með mismunandi meðferðum.

Sp.: Engar mögnunarbönd

A-1 sniðmát

■ Sniðmátið inniheldur prótein óhreinindi eða Taq hemla osfrv .—— Hreinsaðu DNA sniðmát, fjarlægðu prótein óhreinindi eða dragðu út sniðmát DNA með hreinsunarsettum.

■ Afmyndun sniðmátsins er ekki lokið —— Viðeigandi hækkun hitaskynjunarhitastigs og lengja skynjunartíma.

■ Niðurbrot sniðmáts —— Búðu til sniðmátið aftur.

A-2 grunnur

■ Léleg gæði grunna —— Endurgera grunninn.

■ Niðurbrot grunnur ——Færðu háan styrk grunninn í lítið magn til varðveislu. Forðist að frjósa og þíða oft eða við 4 ° C hitaeiningu til lengri tíma.

■ Óviðeigandi hönnun grunna (td grunnlengd er ekki nægjanleg, dimer myndaður á milli grunna o.s.frv.) -Endurhannaðu grunna (forðist myndun grunndimers og auka uppbyggingar)

A-3 mg²⁺einbeitingu

■ Mg²⁺ styrkur er of lítill —— Rétt aukning á Mg²⁺einbeiting: Fínstilltu Mg²⁺ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg²⁺ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

A-4 Glæðishiti

■ Hátt glæðingarhitastig hefur áhrif á bindingu grunns og sniðmáts. ——Lækkaðu hitaglæðann og fínstilltu ástandið með 2 ° C halla.

A-5 framlengingartími

■ Stuttur framlengingartími —— lengja lengingu.

Sp .: Rangt jákvætt

Fyrirbæri: Neikvæð sýni sýna einnig markbandsröðina.

A-1 mengun PCR

■ Krossmengun á markröð eða magnunarvörum —— Varlega skal ekki setja sýnið sem inniheldur markröðina í pípu í neikvæða sýnið eða hella því út úr skilvinduglasinu. Hvarfefnin eða búnaðurinn ætti að vera sjálfstýrður til að útrýma fyrirliggjandi kjarnsýrum og ákvarða tilvist mengunar með neikvæðum eftirlitstilraunum.

■ Mengun hvarfefnis —— Hreinsið hvarfefnin og geymið við lágt hitastig.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ styrkur er of lítill —— Rétt aukning á Mg²⁺ einbeiting: Fínstilltu Mg²⁺ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg²⁺ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

■ Óviðeigandi grunnhönnun og miðaröðin hefur samsvörun við röð sem ekki er miðuð. —— Endurhönnun grunnur.

Sp .: Ósértæk mögnun

Fyrirbæri: PCR mögnunarböndin eru í ósamræmi við væntanlega stærð, annaðhvort stór eða lítil, eða stundum eiga sér stað bæði sértæk mögnunarbönd og ósértæk mögnunarbönd.

A-1 grunnur

■ Léleg grunnleiki

—— Endurhönnun grunnur.

■ Grunnþéttleiki grunnsins er of hár ——Hækka eðlilega hitastigið rétt og lengja skynjunartímann.

A-2 mg²⁺ einbeitingu

■ Mg²⁺ styrkur er of hár ——Lækkaðu Mg2+ styrkinn rétt: Fínstilltu Mg²⁺ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg²⁺ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

A-3 hitastöðug fjölliðu

■ Of mikið magn ensíma —— Draga úr ensímmagni með viðeigandi millibili um 0,5 U.

A-4 Glæðishiti

■ Glæðingarhitastigið er of lágt —— Viðeigandi hækkun á glæðingarhitastigi eða notaðu tveggja þrepa glæðingaraðferðina

A-5 PCR hringrásir

■ Of mörg PCR hringrás —— Fækkaðu PCR hringrásum.

Sp .: Pattery eða smear band

A-1 grunnur——Léleg sértækni ——Hönnaðu grunninn að nýju, breyttu stöðu og lengd grunnunnar til að auka sérstöðu hans; eða framkvæma hreiður PCR.

A-2 sniðmát DNA

—— Sniðmátið er ekki hreint —— Hreinsið sniðmátið eða dragið út DNA með hreinsibúnaði.

A-3 mg²⁺ einbeitingu

——Mg²⁺ styrkur er of hár ——Lækkaðu Mg rétt²⁺ einbeiting: Fínstilltu Mg²⁺ styrkur með röð hvarf frá 1 mM til 3 mM með 0,5 mM bili til að ákvarða ákjósanlegan Mg²⁺ styrkur fyrir hvert sniðmát og grunn.

A-4 dNTP

—— Styrkur dNTP er of hár —— Dragðu úr styrk dNTP á viðeigandi hátt

A-5 Glæðishiti

—— Of lágt glæðingarhitastig —— Viðeigandi hækkun á glæðingarhitastigi

A-6 hringrásir

——Af mörgum hringrásum —— Háttu hringrásarnúmerið

Sp .: Hversu mikið sniðmát DNA ætti að bæta við í 50 μl PCR viðbragðskerfi?

Sp.: Hvernig á að magna upp löng brot?

Fyrsta skrefið er að velja viðeigandi fjölliðu. Venjulegur Taq pólýmerasi getur ekki prófarkalestur vegna skorts á 3'-5 'exonuclease virkni og misræmi mun stórlega draga úr skilvirkni brotanna. Þess vegna getur venjulegur Taq fjöllasi ekki magnað markbrot stærri en 5 kb á áhrifaríkan hátt. Taq pólýmerasa með sérstakri breytingu eða annarri hágæða fjölliðu ætti að velja til að bæta framlengingu skilvirkni og mæta þörfum langrar brotamagnunar. Að auki krefst mögnun langra brota samsvarandi aðlögun grunnhönnunar, afmyndunartíma, framlengingartíma, sýrustig buffer osfrv. Venjulega geta grunnir með 18-24 bp leitt til betri uppskeru. Til að koma í veg fyrir skemmdir á sniðmátum, ætti að minnka tímasetninguna við 94 ° C í 30 sekúndur eða minna í hverri lotu og tíminn til að hækka hitastigið í 94 ° C fyrir mögnun ætti að vera styttri en 1 mín. Þar að auki getur stilling hitastigs á um það bil 68 ° C og hönnun framlengingartíma í samræmi við hraða 1 kb/mín tryggt skilvirka mögnun langra brota.

Sp.: Hvernig á að bæta mögnunartryggni PCR?

Hægt er að minnka villuhlutfall PCR mögnunar með því að nota ýmsa DNA fjölliður með mikilli tryggð. Meðal allra Taq DNA fjölliða sem fundist hafa hingað til hefur Pfu ensím lægsta villuhlutfallið og hæsta tryggðina (sjá meðfylgjandi töflu). Til viðbótar við ensímval geta vísindamenn enn frekar dregið úr PCR stökkbreytingarhraða með því að fínstilla viðbragðsaðstæður, þar með talið að hámarka biðmassasamsetningu, styrk hitastöðugrar fjölliðu og fínstilla PCR hringrásarnúmer.

Skrifaðu skilaboðin þín hér og sendu okkur